Напоследък беше разработен надежден, високочувствителен и бърз метод за диагностициране на различни човешки инфекциозни заболявания. Този метод се нарича "PCR анализ". Какво е това, каква е неговата същност, какви микроорганизми може да разкрие и как да го приемаме правилно, ще разкажем в нашата статия.
История на откриването
Изобретява метода на полимеразна верижна реакция (PCR) от американския учен Кари Мълис през 1983 г. Първоначално диагностичният метод е патентован от Cetus Corporation, в която работи неговият създател. Но през 1992 г. всички права и патенти са продадени на Hoffman-La Roche. След това се оказа, че подобни изследвания са провеждани паралелно и са записани от други американски биолози, като Алис Чен, Дейвид Едгар, Джон Трел. През 1980 г. с този проблем се занимават и съветските учени А. Слюсаренко, А. Каледин и С. Городецки. Поради това беше невъзможно да се определи единственият притежател на авторски права. Много видни биохимици са дали известен принос в развитието на техниката на полимеразна верижна реакция и са патентовали своите иновации. В момента анализътPCR се провежда навсякъде в специално оборудвани лаборатории.
Същността на PCR диагностичния метод
PCR анализ: какво е това и как работи? Същността на метода е да се увеличи обемът на определена микробна среда при изкуствени условия с помощта на специален ензим ДНК полимераза. За това съществуващият ДНК материал се умножава многократно. Така при наличие на патогенен микроорганизъм в пробата, неговото количество ще се увеличи поради биохимични лабораторни манипулации и няма да е трудно да се открие бактерията под микроскоп.
Как се извършва материално изследване?
Изисква се за анализ:
- ДНК матрица;
- грунд, свързващ краищата на парче материал;
- топлоустойчив ензим ДНК полимераза;
- химикали, които карат ензимите да работят правилно;
- буферен разтвор, необходим за създаване на подходящи условия за растежа и развитието на ДНК материала.
За извършване на PCR се извършват 25-30 повторения, състоящи се от три етапа: денатурация, отгряване и удължаване.
За анализа на полимерната верижна реакция се използва специално устройство - усилвател. Съвременното оборудване ви позволява да зададете необходимата програма за тръби за отопление и охлаждане, за да елиминирате грешки по време на диагностиката.
Къде се използва диагностиката?
Методът на полимерната верижна реакция се използва в различни области на медицината:
- престъпници стой идентифицира генетичен материал като коса, слюнка или кръв;
- PCR кръвен тест помага при генотипирането, например, за откриване на индивидуална генетично присъща реакция към определено лекарство;
- използвайки този метод за установяване на наличието на семейни връзки между хората;
- Най-популярният PCR метод се превърна в медицинската диагностика за определяне на различни инфекциозни заболявания.
Какви инфекции открива PCR?
И така, медицината отдавна и успешно използва PCR анализ. Какво е, вече знаем. И какви патогени могат да бъдат открити с него? Следните инфекциозни заболявания се диагностицират чрез PCR метод:
- хепатит A, B, C;
- уреаплазмоза;
- кандидоза;
- хламидия;
- микоплазмоза;
- гарднерелоза;
- инфекциозна мононуклеоза;
- трихомониаза;
- папиломавирусна инфекция;
- туберкулоза;
- херпесна инфекция тип 1 и 2;
- хеликобактериоза;
- цитомегаловирус;
- дифтерия;
- салмонелоза;
- ХИВ инфекция.
Също така, PCR методите се използват при диагностицирането на рак.
Ползи от метода
PCR диагностиката има няколко предимства:
- Висока чувствителност. Дори в присъствието само на няколко молекули ДНК на микроорганизма, PCR анализът определя наличието на инфекция. Методът ще помогне при хронични и латентно протичащи заболявания. Често в такива случаи микроорганизмътиначе е некултивируем.
- Всеки материал е подходящ за изследване, като слюнка, кръв, генитални секрети, коса, епителни клетки. Най-често срещаният е анализът на кръв и урогенитална намазка за PCR.
- Не се изисква дългосрочна реколта. Автоматизираният диагностичен процес ви позволява да получите резултатите от изследването след 4-5 часа.
- Методът е почти 100% надежден. Регистрирани са само единични случаи на фалшиво отрицателни резултати.
- Способността да се идентифицират няколко вида патогени от една проба от материал. Това не само ускорява процеса на диагностициране на заболяването, но и значително намалява материалните разходи. Често лекарят предписва изчерпателен PCR анализ. Цената на изследването, което се състои от определяне на шест патогени, е около 1500 рубли.
Препоръки за подготовка за анализ
За да бъдат резултатите надеждни по време на PCR изследването, трябва да направите теста, като следвате препоръките за предварителна подготовка за диагноза:
- Преди да дарите слюнка, трябва да се въздържате от ядене и приемане на лекарства 4 часа преди вземане на проба. Непосредствено преди процедурата изплакнете устата си с преварена вода.
- Горните правила трябва да се спазват и при вземане на проба от вътрешната повърхност на бузата. След изплакване се препоръчва да направите лек масаж на кожата, за да подчертаете секрета на жлезата.
- Урината обикновено се събира у дома. За да направите това, трябва да проведете задълбочена тоалетнагениталиите. Съберете 50-60 ml урина в стерилен пластмасов контейнер. За да се гарантира чистотата на материала, се препоръчва на жените да поставят тампон във влагалището, а на мъжете да издърпват максимално кожната гънка. Не дарявайте по време на менструацията.
- За да дарите сперма, трябва да се въздържате от полов акт в продължение на 3 дни преди вземането на проба. Лекарите също съветват да не посещавате сауната и да вземете гореща вана, да пиете алкохол и пикантна храна. Трябва да се въздържате от уриниране 3 часа преди теста.
- За вземане на урогенитална намазка, например, ако се извършва PCR тест за хламидия, както жените, така и мъжете се съветват да имат сексуална почивка в продължение на 3 дни. 2 седмици преди анализа не трябва да се приемат антибактериални лекарства. За една седмица трябва да спрете да използвате интимни гелове, мехлеми, вагинални супозитории, душ. 3 часа преди изследването трябва да се въздържате от уриниране. По време на менструация вземането на проби не се извършва, само 3 дни след спиране на кръвното изтичане, можете да вземете урогенитална намазка.
PCR по време на бременност
По време на периода на очакване на бебето много полово предавани инфекции са изключително опасни за нормалното развитие на плода. Полово предаваните болести могат да провокират забавяне на вътрематочното развитие, спонтанен аборт или преждевременно раждане, вродени малформации на детето. Ето защо е изключително важно да се подложи на PCR изследване в ранна бременност. Необходимо е да преминете анализа при регистрация - до 12 седмици.
Материалът се взема от цервикалния канал с помощта на специална четка. Процедурата е безболезнена и не представлява опасност за бебето. Обикновено по време на бременност се извършва анализ за хламидия чрез PCR метода, както и за уреаплазмоза, микоплазмоза, цитомегаловирус, херпес, папиломен вирус. Такъв комплекс от изследвания се нарича PCR-6.
PCR за диагностика на ХИВ
Поради факта, че методът на полимеразна верижна реакция е много чувствителен към промените в тялото и условията на диагнозата, много фактори могат да повлияят на резултата. Следователно PCR анализът за HIV инфекция не е надежден метод, неговата ефективност е 96–98%. В останалите 2-4% от случаите тестът дава фалшиво положителни резултати.
Но в някои ситуации ХИВ PCR диагностиката е незаменима. Обикновено се дава на хора с фалшиво-отрицателен резултат ELISA. Такива показатели показват, че човек все още не е развил антитела срещу вируса и те не могат да бъдат открити без многократно увеличаване на броя. Точно това може да се постигне чрез провеждане на PCR кръвен тест.
Тези диагностика са необходими и за деца от първата година от живота, родени от ХИВ-позитивна майка. Методът е единственият начин за надеждно определяне на статуса на дете.
PCR за диагностициране на хепатит
Методът на полимеразна верижна реакция позволява откриване на ДНК на вируса на хепатит A, B, C много преди образуването на антитела срещу инфекцията или появата на симптомите на заболяването. PCR анализът за хепатит С е особено ефективен, тъй като в 85% от случаите това заболяване е асимптоматично и безнавременното лечение навлиза в хроничен стадий.
Навременното откриване на патогена ще помогне за избягване на усложнения и дългосрочно лечение.
Изчерпателно PCR изследване
Комплексен PCR анализ: какво е това? Това е изследване по метода на полимерна верижна реакция, който включва едновременно определяне на няколко вида инфекции: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes gonorrimavirus тип 1 и parrima 2. Цената на такава диагностика варира от 2000 до 3500 рубли. в зависимост от клиниката, използваните материали и оборудване, както и от вида на анализа: качествен или количествен. Какво е необходимо във вашия случай - лекарят ще реши. В някои случаи е достатъчно само да се определи наличието на патогена, в други, например, при HIV инфекция, количественият титър играе важна роля. Когато се диагностицират всички горепосочени патогени, изследването се нарича "PCR-12 анализ".
Препис на резултатите от анализа
Дешифрирането на PCR анализа не е трудно. Има само 2 скали на индикатора - "положителен резултат" и "отрицателен резултат". Когато се открие патоген, лекарите могат да потвърдят наличието на заболяването с 99% сигурност и да започнат лечение на пациента. При количествен метод за определяне на инфекцията, съответната колона ще посочи цифровия индикатор на откритите бактерии. Само лекар може да определи степента на заболяването и да предпише необходимото лечение.
В някои случаи, например, при определяне на ХИВ инфекция чрез PCR, с отрицателен резултат, се налага провеждането на допълнителни изследвания за потвърждаване на получените показатели.
Къде да се тествам?
Къде да направите PCR тест: в обществена клиника или в частна лаборатория? За съжаление в общинските лечебни заведения апаратурата и методите често са остарели. Ето защо е по-добре да се даде предпочитание на частни лаборатории с модерно оборудване и висококвалифициран персонал. Освен това в частна клиника ще получите резултати много по-бързо.
В Москва много частни лаборатории предлагат PCR анализ за различни инфекции. Например, в такива клиники като Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, се извършва PCR анализ. Цената на прегледа е от 200 рубли. за идентифициране на един патоген.
Може да се заключи, че диагностицирането на инфекциозни заболявания чрез PCR в повечето случаи е бърз и надежден начин за откриване на патогена в организма в ранните етапи на инфекцията. Но все пак в определени случаи си струва да изберете други диагностични методи. Само специалист може да определи необходимостта от такова изследване. Дешифрирането на PCR анализа също изисква професионален подход. Следвайте съветите на Вашия лекар и не правете изследвания, от които не се нуждаете.
